La quinta temporada de 'Buffy, cazavampiros' se emitió originalmente entre el 26 de septiembre de 2000 y el 22 de mayo de 2001, con un total de 22 capítulos. Fue la última temporada que se emitió en The WB, antes de mudarse a UPN. The WB la promocionó como la última temporada y el último episodio fue concebido como posible final de la serie, antes de la renovación.
La temporada comienza con el enfrentamiento de Buffy contra el mítico Conde Drácula, que llega a Sunnydale en busca de la famosa Cazavampiros. Al final de este primer episodio se introduce por sorpresa al personaje de Dawn Summers, la hermana pequeña de Buffy. Aunque es la primera vez que la vemos, todo el mundo actúa como si siempre hubiera estado ahí, ocultando un plan secreto que se irá desentrañando a lo largo de la temporada.
La villana principal de la temporada es Glory (de nombre original Glorificus), una Diosa del infierno que ha sido desterrada de su dimensión después de una guerra y ha llegado a la Tierra, donde solo puede permanecer mientras está conectada a su forma humana alternativa, un joven doctor llamado Ben, con quien lucha por el control de su cuerpo. Glory adopta la forma de una bella y cruel mujer y conserva su poder demoníaco en la Tierra consumiendo la energía de los humanos.
Su propósito es la búsqueda de La Llave, que le permitirá difuminar las fronteras entre dimensiones para volver a su mundo y desatar el Infierno en la Tierra. Pronto se descubre que la "nueva" hermana de Buffy es La Llave y fueron sus protectores los que la convirtieron en humana para esconderla, implantando recuerdos falsos en su familia y amigos. Buffy y su pandilla deben proteger a Dawn de Glory, mientras esta siembra el terror en Sunnydale consumiendo la energía de los demás.
Por otro lado, Buffy se enfrenta a una amenaza que nada tiene que ver con el mundo sobrenatural cuando se desvela que su madre tiene un tumor cerebral. Esto marcará a la Cazadora y a Dawn, que deberán apoyarse la una en la otra como hermanas. Mientras, Riley se marcha de Sunnydale después de darse cuenta de que Buffy no lo ama y Spike se da cuenta de que se ha enamorado de la Cazadora desde que lucha a su lado, aunque ella lo rechaza. Ante su negativa, el vampiro crea un robot a imagen y semejanza de Buffy, llamado Buffybot.
Anya empieza trabajar en la tienda de magia de Giles, The Magic Box, y comienza a explorar sus emociones y lo que significa ser humano. El ataque de Glory a Tara sume a su novia, Willow, en un estado de ira descontrolada que la lleva a caer en la magia negra. Willow se transforma en una bruja cada vez más poderosa, pero su personalidad empieza a volverse más oscura y su dependencia de la magia comienza a preocupar a los demás.
En la recta final de la temporada, la muerte de Joyce (en el aclamado episodio 'El cuerpo') deja devastados a los Scoobies, pero la lucha contra Glory no se detiene. Cuando la Diosa descubre que Dawn es la Llave, la secuestra para llevar a cabo su siniestro plan. Buffy y sus amigos van en su rescate. Willow se enfrenta a Glory para devolver la cordura a Tara, mientras Giles trata de derrotar a Ben, pero es demasiado tarde y el portal interdimensional se ha abierto, por lo que Buffy deberá tomar una decisión para salvar el mundo que cambiará la vida de todos.